是什么制成单克隆、多克隆或重组抗体?


Anthony C 发布于 2019 年 1 月 30 日 03:10:00

当您购买抗体时,有太多因素需要考虑。例如,它是否可以在我的细胞或组织模型中起作用?是否在我要使用的应用中进行了测试? 有时,由于您的选择有限,很难找到所需的东西,但在其他情况下,可能有几种试剂似乎可以在您的实验中使用。

是什么制成单克隆、多克隆或重组抗体?

如果您正在寻找针对同一靶点的单克隆、多克隆或重组抗体,又是什么情况呢?那么区别是什么呢?其中一个比另一个好吗?还是它们都是为不同目的而设计的?这是一个复杂的问题,但绝对值得一问。

多克隆抗体是产生自可检测同一免疫原内不同表位的不同 B 淋巴细胞群体的抗体的异质混合物。多克隆抗体通常在兔中产生,但也可以在有蹄类动物(绵羊、山羊、马等)、啮齿类动物和鸡中产生,具体取决于研究人员的需求。多克隆的产生通常涉及从被免疫的动物收集血液,分离免疫球蛋白级分以及亲和纯化以去除非特异性抗体群。兔由于其更大的抗体多样性和产生针对多种抗原(包括具有或不具有翻译后修饰的小分子和肽)的免疫应答的能力而具有超越其他种属的显著优势。

单克隆抗体是产生自单个 B 细胞克隆的同质抗体,可检测免疫原内的单个表位。所有单克隆抗体均始于多克隆抗体库,但通过选择或克隆过程进行分离,以鉴定和扩展所需的单价克隆。单克隆抗体通常由啮齿类动物宿主、兔和骆驼科动物产生,并根据所需抗体的种属和类型通过各种方法产生(如下所述)。 传统上,单克隆抗体是通过永生化 B 细胞的稳定克隆产生的,方法是在小鼠中注射和收集腹水,或者培养表达抗体的 B 细胞并收集上清液。最近,更新的技术使得能够从免疫反应性 B 细胞中克隆免疫球蛋白重链和轻链基因,从而在哺乳动物细胞系中表达和生产重组单克隆抗体。

如上所述,有许多产生抗体的方法。通常,多克隆抗体是从被免疫动物的血清中纯化的。可以使用许多不同的策略来生产单克隆抗体。大多数单克隆抗体是通过培养产生抗体的 B 细胞杂交瘤并从细胞中收集上清液来产生的。根据抗体的效价和亲和力,通过这种方法产生的抗体可在有或无额外纯化的情况下使用。替代方法包括将 B 细胞杂交瘤注射到合适宿主的腹膜腔内,并在一段时间后收集腹水。该方法具有快速产生大量抗体的优点,但是具有需要动物宿主的缺点,并且可能需要额外的纯化步骤以去除脂质和其他碎片。或者,可以将单克隆抗体的重和轻免疫球蛋白链克隆到表达载体中,转染到适合抗体生产的哺乳动物细胞系中,并异位表达以收集和纯化。抗体的重组生产由于其固有的一致性和基因改造抗体的能力,在抗体制造商中正在成为增长的趋势。

无论克隆形式或生产方法如何,在用于实验之前,必须在预期的应用中正确验证所有抗体。即使使用最佳抗体,无论克隆形式、宿主种属或同种型如何,使用不当也会产生假的或误导的结果。

   多克隆抗体  单克隆抗体
 开发和生产成本  开发和生产便宜  开发昂贵,生产费用不高
 开发和生产的技术专长  低  高
 开发时间  短(在四个月内免疫纯化的多克隆抗体)  长(需要多轮克隆/选择才能分离到同质)
 验证时间  初步验证后,必须重新验证每个新取血或批次以确保一致性  生产方法可确保更高的一致性,但强烈建议在生产运行之间进行重新测试
 寄主种属  兔、绵羊、山羊、马、鸡  小鼠、大鼠、兔、豚鼠、羊驼、美洲驼
 生产方式  从血清中收集和纯化
  1. 从腹水或培养的细胞上清液中收集和纯化
  2. 重链和轻链在哺乳动物细胞系中的重组表达
 敏感度  由于识别多个表位而提高了灵敏度,是低丰度蛋白的理想选择  灵敏度取决于抗体对目标表位的亲和力,大多数克隆是根据亲和力和功能性选择的
 特异性 由于多价而可能导致脱靶反应 由于单价相互作用,特异度更高
 一致性  由于免疫原性漂移和其他因素而导致批次间差异的风险  由于选择和生产方法,批次间高度一致
 亲和力     由于抗体的异质性只能估算  由于表位和抗体的单价性质,可测量
 能够与染料和其他官能团结合?  是   是
 应用  WB、IP、IF/IC、IHC、流式、ChIP、ELISA  WB、IP、IF/IC、IHC、流式、ChIP、ELISA
 稳定性  高  

 兔单克隆抗体:高
 小鼠单克隆抗体:中等

 用作伴随或临床诊断?  很少  是
 用作治疗剂?  很少  是
 能够在遗传水平上工程化抗体(人源化等)?  否  是

 

了解有关抗体验证的更多信息。

 

 

相关资源和其他信息:

 多克隆抗、单克隆抗与重组抗体:有什么区别?通过 BenchSci

 兔抗体,通过 Labome

 Lipman, et al.  (2005) 单克隆抗体与多克隆抗体:区分特征、应用程序和信息资源. ILAR 杂志. Vol. 46(3): 258-68

 Roncador, et al. (2015)查找和验证适合研究抗体的欧洲抗体网络的实用指南.单克隆抗体. Vol. 0(0): 1-10

 Weber et al. (2017)从兔抗体库到兔单克隆抗体. 实验与分子医学. Vol. 49: e305

 Rajewski, Klaus (1996) 抗体系统中的克隆选择和学习。自然. Vol. 381: 751-758.

 Cheung et al. (2012)蛋白质组学方法,用于从血清中鉴定和克隆单克隆抗体. 自然生物技术. Vol. 10(5): 447-454

 Ascoli 和 Aggeler (2018) 被忽略的使用多克隆抗体的好处. 生物技术 65 (3):127-136

 

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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