网络研讨会:简化蛋白质组


Claire S 发布于 2015 年 12 月 16 日 03:00:00

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翻译后修饰:基于质谱分析的蛋白质组的抗体富集情况

继续我们的简化蛋白质组学主题,我们承办了一场网络研讨会,主讲人为 Cell Signaling Technology 蛋白质组学团队的首席科学家 Matthew Stokes 博士,以及哈佛医学院 Gygi Lab 的博士后研究员 Christopher Rose 博士。

Stokes 博士介绍了 PTMScan® 技术,这种方法即在 LC-MS/MS 分析前采用抗体对复杂混合物中的特定翻译后修饰 (PTM) 肽(例如磷酸化、甲基化或泛素化等)加以富集。Rose 博士演示了他所在的实验室如何综合利用 PTMScan 技术和等重标记法,特别是串联质谱标记(TMT),在 Bortezomib 治疗的细胞中量化了超过 15,000 项泛素化事件。

了解有关 PTMScan® 的信息

 你可以在此处浏览更多蛋白质组学网络研讨会,也可以登录我们的视频和网络研讨会页点播观看各种主题的网络研讨会。 

PTMScan® 蛋白质组学的摘要:对翻译后修饰肽进行检测和定量。

蛋白翻译后修饰 (PTM) 可调控细胞生长、发育和疾病生物学的各个方面。对这些 PTM 进行蛋白质组分析已成为更好地理解细胞信号转导的核心。目前的蛋白质组方法和仪器能够在一次实验中检测数千条肽。Cell Signaling Technology 的 PTMScan 蛋白质组学方法将基于抗体的富集方法和液相色谱串联质谱法 (LC-MS/MS) 相结合,以对翻译后修饰肽进行检测和定量。产品和服务可用于分析细胞系、组织、异种移植物或其它生物材料中的蛋白磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化、琥珀酰化以及半胱天冬酶裂解活化 (PTMScan Discovery)。服务还专为靶向和深入覆盖关键信号转导通路而设计 (PTMScan Direct)。PTMScan 方法已成功应用于生物标记物发现、药物开发和各项研究,以更好地了解细胞信号转导。

使用泛素残迹免疫沉淀法、nLC-MS/MS 和同重元素标记进行多重定量泛素化组分析。近来,由于质谱仪和试剂的发展,大规模多重定量蛋白质组实验已变得更易于进行。如今,通过使用等量异位标签(例如串联质谱标签),在 1.5 天的分析中,通常可在 10 份实验样品中定量超过 8,000 个蛋白。但到目前为止,细胞泛素化组分析始终受限于一次实验中可多重分析的样品数。在本次网络研讨会中,我将重点介绍样品制备方法,包括使用 PTMScan 泛素残迹基序抗体 (Cell Signaling Technology) 进行免疫沉淀,以及使用等量异位标记来标记生成的肽。我还将讨论可用于准确分析细胞泛素化组的仪器方法(例如同步前体选择 MS3 [SPS-MS3])。我将重点介绍这种方法的应用,其中,在用 Bortezomib 处理后,我们可在 10 个定量通道里同时定量超过 15,000 个泛素化位点的变化。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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