蛋白质印迹实验失败的成本


Claire S 发布于 2016 年 9 月 14 日 03:00:00


实验失败的代价

考虑实验室成本并不像研究你最喜爱的信号转导通路那般愉快。但由于很难获得研究经费,这是在挑选用于蛋白质印迹实验的试剂时应该考虑到的问题。务必要记住你的一抗质量很重要,因为整个实验的成败就取决于抗体是否可靠、有特异性且敏感。如果抗体的性能不如预期,那么你的实验有可能会失败……而且如果一个蛋白质印迹实验失败的话,成本可能比你想象的要多。

抗体价格、抗体验证程度以及支持数据的质量在各供应商之间的差异非常大。大公司经常会以其产品供应的广度为傲,但这些来源的抗体的可靠性、特异性和敏感性可能达不到你的期望。相比之下,你可以从一家在内部生产和验证自己的一抗,并与你分享数据的公司选择抗体。特征描述不当的抗体可能会缺乏特异性,从而导致假阳性结果,或者缺乏敏感性,从而导致假阴性结果。更糟糕的是,没有适当的对照,某种抗体的失败可能并不明显,而且你将在错误结果的基础上继续进行项目。

在样品制备和进行印迹实验期间,蛋白质印迹实验可能既耗时又昂贵。制备样品的成本可能越积越多,特别是在使用组织样品或原代细胞培养物的情况下。例如,实验室动物的样品会有潜在成本,比如饲养。除了实际的实验时间进程,动物要经过数周才能达到成熟状态。这意味着样品采集最终要耗费数千美元,并需要数周,甚至数月的时间。如果在所有这些努力之后,因验证不当的抗体而导致实验失败,这将是一个悲剧。

如果蛋白印迹实验失败,你就不得不返回去进行大量的疑难排除。这意味着你不得不在优化实验条件上耗费时间和金钱,例如通过滴定抗体来进行优化,因此你用在其他实验上的时间就更少了。同时,你宝贵的资助基金将付之东流。出于这些原因,必须自始至终使用一种你可以信赖的抗体。为了确保这一点,你的抗体应经过彻底验证,并具备已知的最佳稀释度。为了降低失败的风险,你可以通过确认它是否符合以下要求来自行验证你的抗体:

  • 使用对照细胞/组织时检测到一根具备预计分子量的清晰条带。
  • 经以下一种或多种情况验证了特异性:
    • 激活剂或抑制剂处理
    • 阳性和阴性细胞系或组织
    • 对磷酸化特异性抗体进行磷酸酶处理
    • 使用 siRNA 或其他方法进行敲落,或使用小鼠模型时进行敲除
    • 通过滴定确定最佳稀释度

这涉及进行多个蛋白质印迹实验,可能需要购买其他试剂,成本较高。或者,你可以从某个已满足以上所列标准,并与你分享高质量数据的供应商那里购买抗体。这些经证实的抗体会最大程度地增加你的蛋白质印迹实验的成功几率。最后,这会帮助你以更快的速度、更低的成本获得可供发表的可靠数据,并推进你的项目。

购买一种表征不良的抗体可能最终会耗费你大量的成本。不要浪费可用于下一个实验的时间和金钱。购买一种你可信赖、经过充分验证的抗体。

在寻找蛋白质印迹实验步骤的技巧?“成功进行蛋白印迹实验的指南”包含了以下有用的信息:

  • 10 步实验步骤
  • 疑难排解技巧
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仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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