“技术提示”视频:牛奶或 BSA?为蛋白印迹实验选择一种封闭蛋白


Ken B 发布于 2018 年 9 月 05 日 03:00:00

如你的蛋白印迹膜要用 TBST 洗涤三次,则首次洗涤可将计时器设为五分钟。现在该怎么办?当然,你可以在午餐前 30 分钟检查你的邮件或社交媒体。或者,你可以做有益的事情,比如查看某个 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频!这是一个新的短视频系列,开发和验证 CST (Cell Signaling Technology) 抗体的科学家们在此提供见解和实验步骤提示。

第一个 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频研究你的膜封闭蛋白选择 -脱脂奶粉牛血清白蛋白 (BSA) - 会如何影响你的蛋白印迹结果。 

 

我们会在此处的博客上发布更多“技术提示”视频,但如果你有 YouTube 帐号,请确保查看“技术提示”播放列表订阅,以便上传新视频时通知你。 

 

 订阅技术提示

有一个你们希望包含在将来的某个“技术提示”视频中的实验步骤问题?请在下面的博客评论中告诉我们!

转录:

- 在某个蛋白印迹实验中,我应该使用哪种蛋白来封闭转移膜?我叫 Srikanth,是 Cell Signaling Technology 的一名产品科学家,接下来的是 CST 技术提示。

关于蛋白印迹实验,我们经常遇到的一个常见问题是,我该用什么来封闭,牛奶或 BSA?封闭步骤的目的是减少因非特异性结合而产生的背景数量。BSA 仅由一种蛋白组成,即 60 kDa BSA,而牛奶则由许多大小不一的蛋白构成。因此,你可以有更大的机会来减少更多的背景结合。

我们建议你用经 TBST 稀释的 5% 牛奶,在室温下摇晃一小时,来封闭我们的所有非偶联一抗。这包括磷酸化特异性和总抗体。现在,我已经听到有点击、评价和标签询问“牛奶中的磷酸酶会怎么样?”。是的,有一些文章反对使用牛奶来检测磷酸化信号。

我来强调一下,在我们的所有内部检测中,我们未发现任何这样的问题。CST (Cell Signaling Technology) 科学家们进行了这么多次蛋白印迹实验,我们每天至少要配制一次牛奶,有时甚至一天配制多次。不过,如果牛奶缓冲液放置了一周、两周甚至更长时间不使用,那么磷酸酶影响信号的机率将会增加。但再次强调,我们没有看到任何这些影响,因为我们每天都使用新鲜的牛奶缓冲液。

磷酸化 Akt:牛奶与 BSA

这些是产品 #13038 (Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb) 的图片,产品用来检测经 PDGF 处理的 3T3 细胞的裂解物。印迹之间的唯一区别是一张膜用牛奶封闭,另一张膜用 BSA 封闭。显然,用 BSA 封闭的膜的背景更高。但用牛奶封闭膜时,磷酸化信号仍然很强且清晰。

因此,封闭膜后,请参阅该产品的专用数据表,了解建议的抗体结合缓冲液。这一般是牛奶或 BSA,但取决于特定抗体。我希望这有所帮助。全部应用特定的实验步骤可在 cellsignal.com 具体产品页上找到。如果你有任何其他问题,请通过 cellsignal.com/support 随时联系 CST (Cell Signaling Technology) 的任何科学家。

如需更多 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频,请在我们的 YouTube 页上订阅。祝你们实验成功,我们下次再见!谢谢。

Cell Signaling Technology、CST 和 XP 均是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。 

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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