CST 博客: 实验室展望

Cell Signaling Technology (CST) 官方博客,在这里我们讨论您在实验台前工作时的期望,分享贴士、技巧和信息。

牛奶或 BSA?如何针对蛋白质印迹法选择封闭用蛋白质 [视频]

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如你的蛋白印迹膜要用 TBST 洗涤三次,则首次洗涤可将计时器设为五分钟。现在该怎么办?当然,你可以在午餐前 30 分钟检查你的邮件或社交媒体。或者,你可以做有益的事情,比如查看某个 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频!

这是一个新的短视频系列,开发和验证 CST (Cell Signaling Technology) 抗体的科学家们在此提供见解和实验步骤提示。

针对蛋白质印迹法选择封闭用蛋白质

这个 CST“技术提示”视频研究您的膜封闭用蛋白质选择 — 脱脂奶粉牛血清白蛋白 (BSA) — 如何影响您的蛋白质印迹结果。 

在视频中,CST 的产品科学家 Srikanth Subramanian 博士介绍了膜封闭用蛋白质选择的注意事项,包括乳中磷酸酶是否会影响您的信号。

 

我们会在此处的博客上发布更多“技术提示”视频,但如果你有 YouTube 帐号,请确保查看“技术提示”播放列表订阅,以便上传新视频时通知你。 

 订阅技术提示

视频字幕:

我应该使用哪种蛋白质封闭蛋白质印迹法的转移膜?我叫 Srikanth,是 Cell Signaling Technology 的一名产品科学家,接下来的是 CST 技术提示。

关于蛋白印迹实验,我们经常遇到的一个常见问题是,我该用什么来封闭,牛奶或 BSA?封闭步骤的目的是减少因非特异性结合而产生的背景量。BSA 仅由一种蛋白组成,即 60 kDa BSA,而牛奶则由许多大小不一的蛋白构成。因此,你可以有更大的机会来减少更多的背景结合。

我们建议你用经 TBST 稀释的 5% 牛奶,在室温下摇晃一小时,来封闭我们的所有非偶联一抗。这包括磷酸化特异性和总抗体。现在,我已经听到有点击、评价和标签询问“牛奶中的磷酸酶会怎么样?”。是的,有一些文章反对使用牛奶来检测磷酸化信号。

我来强调一下,在我们的所有内部检测中,我们未发现任何这样的问题。CST (Cell Signaling Technology) 科学家们进行了这么多次蛋白印迹实验,我们每天至少要配制一次牛奶,有时甚至一天配制多次。不过,如果牛奶缓冲液放置了一周、两周甚至更长时间不使用,那么磷酸酶影响信号的机率将会增加。但再次强调,我们没有看到任何这些影响,因为我们每天都使用新鲜的牛奶缓冲液。

磷酸化 Akt:牛奶与 BSA

这些是在 PDGF 处理的 3T3 细胞的裂解物上测试的产品 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb #13038 的图像。印迹之间的唯一区别是一张膜用牛奶封闭,另一张膜用 BSA 封闭。显然,用 BSA 封闭的膜的背景更高。然而,采用乳中封闭的膜时,磷酰信号仍然很强且清晰。

因此,封闭膜后,请参阅该产品的专用数据表,了解建议的抗体结合缓冲液。这一般是牛奶或 BSA,但取决于特定抗体。我希望这有所帮助。全部应用特定的实验步骤可在 cellsignal.com 具体产品页上找到。如果您有任何其他问题,请通过 cellsignal.com/support 随时联系 CST 的任何科学家。

如需更多 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频,请在我们的 YouTube 页上订阅。祝你们实验成功,我们下次再见!谢谢。

Cell Signaling Technology、CST 和 XP 均是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。 

Kenneth Buck, PhD
Kenneth Buck, PhD
作为一名受过训练的细胞生物学家,Ken 在罗格斯大学获得了博士学位,并继续在耶鲁大学担任博士后研究员,在那里他研究了再生神经元细胞运动所涉及的细胞骨架动力学和信号转导机制。在 CST,Ken 与科学家合作创建多媒体科学通信。当他不写视频脚本或不在工作室时,可以观察到他在自然栖息地,在马萨诸塞州多岩石的北岸与同事一起骑山地自行车。

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