“技术提示”视频:我该使用多少抗体来进行 ChIP?


Ken B 发布于 2018 年 11 月 28 日 03:15:00

现在可以查看 CST 技术提示播放列表中的其他视频了!在这一版本的技术提示中,我们将解决客户向我们 ChIP 团队提出的一个关于常见实验步骤的问题:染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验需要使用多少抗体。抗体并不总是越多越好 - 观看视频,了解原因。 

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我该使用多少抗体来进行 ChIP 实验? | CST 技术提示
 

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我该使用多少抗体来进行 ChIP 实验?我叫 Fang Chen,是 Cell Signaling Technology ChIP 团队的一名高级科学家,下面是 CST 技术提示。

在一次 ChIP 实验中使用的最佳抗体量根据抗体的亲和力、敏感性和特异性而有所不同。抗体并不是越多越好。

正如您在这些滴定数据中所看到的,抗体过多和过少都会减弱 ChIP 信号。对于大多数经 ChIP 验证的抗体而言,在 ChIP 实验中,0.5-2 µg 抗体能产生最佳信噪比。

18-CHP26237 数据

在我们的内部抗体验证工作中,ChIP 团队的科学家在每次免疫沉淀中使用 10 µg 染色质进行滴定实验,以确定最佳的抗体稀释度,并随后将这些信息提供给您。

重要的是要维持抗体量与染色质量的比率,而不是抗体量与免疫沉淀体积的比率。例如,CST 建议每次免疫沉淀使用 10 µg 染色质 DNA。但如果使用了少于 10 µg 的染色质 DNA,则应按比例减少抗体量。

CST 建议每次免疫沉淀的总体积为 500 µL。如果使用等量 DNA 进行 ChIP,但免疫沉淀体积更大,则无需添加额外的抗体,但延长孵育时间可能有助于补偿稀释的反应。

对于 IgG 等对照抗体而言,您应该使用与您的检测抗体相同的量,以便进行公平比较。

谢谢观看。您可以在 cellsignal.com 上各抗体的产品页中找到所有应用的完整实验步骤。

如果您对某种抗体或实验步骤有任何疑问,您可以在 cellsignal.com/support 上联系我们的一位科学家。

切勿忘记订阅新的技术提示视频,我们下次再见。

祝您实验成功!

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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