CST 博客: 实验室展望

Cell Signaling Technology (CST) 官方博客,在这里我们讨论您在实验台前工作时的期望,分享贴士、技巧和信息。

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在 D 先生的大二英语课上,几乎没有一个话题是禁忌或超出限度的。即便是我们的班级项目,他也鼓励我们寻找我们真正感兴趣的话题,有时候,这意味着要教 D 先生一些他完全陌生的东西。但如果你的演讲包括极漂亮的视觉效果,你就必须准备好精彩生动的口头描述。黄斑变性让他本来健康的眼睛变得毫无用处。 

他有时会戴上他那放大镜一样的眼镜,这让他的眼睛看起来几乎是实际的三倍,但也没有多大用处。照他自己的说法,他“好”的那只眼睛视力为 20/400,不好的那只眼睛视力为 20/800。他很差的视力似乎没有让他变得沮丧,但就像许多患有黄斑变性的人一样,D 先生逐渐接受世界正在慢慢变得暗淡的事实。

近些年,D 先生以及和他一样的人们似乎听到了一些好的消息。研究人员认为,炎性体信号转导是一个年龄相关的黄斑变性 (AMD) 的关键因素,同时特别关注 NLRP3 蛋白 (1-3)。这可能让我们离目标更近了一步:开发抵抗慢慢使外界变模糊的力量的疗法。但根据《科学报道》中最近发表的一篇文章,这些研究的有效性受到质疑,而罪魁祸首肯定是可疑抗体。

有两种类型的 AMD:湿性和干性。湿性 AMD 可以获得相当好的治疗,因为我们能合理地理解它的发病机制 (4)。另一方面,我们知道干性 AMD 涉及视网膜色素上皮细胞 (RPE) 衰变,但干性 AMD 背后的机制更难以捉摸,这阻碍了治疗方案的开发 (5)。一个普遍的假设是 NLRP3 是这种变性的一个因素,原因在于观察到 RPE 表达上调。但其他发表的数据则与此矛盾,这些数据的作者怀疑抗体敏感性可能是造成这种差异的一个因素 (6-12)。考虑到新的 NIH 指南要求对关键生物资源进行认证,这些作者确定所有这些都值得进一步研究。

他们使用已确立的 NLRP3 表达模型,对市场上可买到的抗体进行验证,以此作为开始。他们使用阳性对照模型、敲除小鼠,并检测在 NLRP3 诱导刺激下的上调情况,以评估所有抗体的特异性。他们用一个稀释系列来评估敏感性,但仅使用 CST (Cell Signaling Technology) 抗体,因为使用所有其他抗体时特异性检测都失败,或敏感性不够。通过使用经验证的 CST (Cell Signaling Technology) 抗体,他们在经各种诱导 NLRP3 的刺激物处理的人 RPE 细胞系和原代胚胎 RPE 培养物中检测 NLRP3 表达。结果表明,这些模型不表达该蛋白。因此,NLRP3 不大可能是 AMD 的一个影响因素 (13)。

如今,可重复性是一个热点问题。你几乎肯定听说过像这样的骇人故事,但是你有没有问过关于你自己的实验的难题?你相信你的试剂有效吗?你如何知道它们会有效?这篇最新的报道可谓是喜忧参半。知道我们的抗体通过了测试后,我们非常高兴。凭着我们严格的验证标准,应该会通过!但在这个好消息之前是坏消息。我们绝不愿意看到研究人员遭遇挫折。更糟的是,我们讨厌看到像 D 先生这样的疾病患者等待被治愈。

阅读《科学报道》文章

CST (Cell Signaling Technology) 的可重复性

参考文献

  1. Doyle, S.L. et al. NLRP3 has a protective role in age-related macular degeneration through the induction of IL-18 by drusen components. Nat Med 18, 791–798, https://doi.org/10.1038/nm.2717 (2012).
  2. Doyle, S.L. et al. IL-18 attenuates experimental choroidal neovascularization as a potential therapy for wet age-related macular degeneration. Sci Transl Med 6, 230ra244, https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3007616 (2013).
  3. Tarallo, V. et al. DICER1 loss and Alu RNA induce age-related macular degeneration via the NLRP3 inflammasome and MyD88. Cell 149, 847–859, https://doi.org/10.1016/j.cell.2012.03.036(2012).
  4. Rosenfeld, P. J. et al. Ranibizumab for Neovascular Age-Related Macular Degeneration. N Eng J Med 355, 1419–1431, https://doi.org/10.1056/NEJMoa054481 (2006).
  5. Deangelis, M. M., Silveira, A. C., Carr, E. A. & Kim, I. K. Genetics of age-related macular degeneration: current concepts, future directions. Semin Ophthalmol 26, 77–93, https://doi.org/10.3109/08820538.2011.577129 (2011).
  6. Anderson, O. A., Finkelstein, A. & Shima, D. T. A2E induces IL-1ss production in retinal pigment epithelial cells via the NLRP3 inflammasome. PLoS One 8, e67263, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0067263 (2013).
  7. Gelfand, B. D. et al. Iron Toxicity in the Retina Requires Alu RNA and the NLRP3 Inflammasome. Cell Rep 11, 1686–1693, https://doi.org/10.1016/j.celrep.2015.05.023 (2015).
  8. Shi, G. et al. Inflammasomes Induced by 7-Ketocholesterol and Other Stimuli in RPE and in Bone Marrow–Derived Cells Differ Markedly in Their Production of IL-1b and IL-18. IOVS 56, 1658–1664, https://doi.org/10.1167/iovs.14-14557 (2015).
  9. Tseng, W. A. et al. NLRP3 inflammasome activation in retinal pigment epithelial cells by lysosomal destabilization: implications for age-related macular degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci54, 110–120, https://doi.org/10.1167/iovs.12-10655 (2013).
  10. Wang, K. et al. Amyloid beta induces NLRP3 inflammasome activation in retinal pigment epithelial cells via NADPH oxidase- and mitochondria-dependent ROS production. J Biochem Mol Toxicol. https://doi.org/10.1002/jbt.21887 (2016).
  11. Wang, Y. et al. NLRP3 Upregulation in Retinal Pigment Epithelium in Age-Related Macular Degeneration. Int J Mol Sci 17, https://doi.org/10.3390/ijms17010073 (2016).
  12. Zhang, S., Yu, N., Zhang, R., Zhang, S. & Wu, J. Interleukin-17A Induces IL-1beta Secretion From RPE Cells Via the NLRP3 Inflammasome. Invest Ophthalmol Vis Sci 57, 312–319, https://doi.org/10.1167/iovs.15-17578 (2016).
  13. Kosmidou C. et al. Issues with the Specificity of Immunological Reagents for NLRP3: Implications for Age-related Macular Degeneration. https://doi.org/10.1038/s41598-017-17634-1 (2018)
Chris Sumner
Chris Sumner
Chris Sumner 是 Lab Expectations 的主编。不阅读或撰写治疗疾病的内容时,他总是在林间漫步、弹吉他,或者寻找世界上最棒的龙虾卷。

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