支原体污染!


Michelle G 发布于 2018 年 12 月 05 日 03:15:00

任何形式的细胞培养污染都会浪费您的时间,毁掉您的辛苦工作,而支原体污染尤其具有毁灭性。

支原体是极小的细菌,其细胞膜周围没有细胞壁。支原体不仅无法用光学显微镜检测到、难以消灭,还能够迅速渗透整个实验室,而且感染还会极大地影响您的实验结果,因为支原体会影响培养细胞的形态和生理特征。因此,您会发现支原体绝不仅仅是一个令人烦恼的问题,它还在不可重复的研究中起着主要作用。  

OVCAR8 支原体

OVCAR8 细胞与支原体污染

预防:处理支原体的最好方法是首先避免污染

  1. 始终穿戴适当的个人防护设备 (PPE),包括手套和干净的实验服。谨记,至少每周更换一次实验服。

  2. 采用无菌技术对保护您的细胞和预防污染至关重要。以下是一些最佳做法:
    1. 让细胞培养罩保持整洁,以便气流保持畅通无阻。
    2. 在物品上喷洒 70% 乙醇后再放进培养罩。
    3. 盖好平板和瓶子。
    4. 避免在无盖器皿上方甩动手和胳膊。

  3. 立即清理任何溢出物。

  4. 让您的孵育器保持清洁。避免飞溅和溢出。严格遵守清洁时间表。定期用漂白剂清洁孵育器,每周更换或清洁一次接水盘有助于预防内部细胞污染。
       
  5. 把所有新的或之前未检测的细胞系隔离放在一个指定的孵育器中。支原体尤其容易从一个区域扩散到另一个区域。在您能进行检测之前,切勿将新的或有疑问的细胞系放在靠近其他细胞的地方,以确保它们没有被污染。

A549 清洁
清洁 A549 细胞

检测:支原体太小,无法观察,因此您需要一种可靠的检测方法。

  1. 市场上有许多市售检测试剂盒,有时会同时使用多种方法来确保获得明确的结果。成本、等待结果的时间和您实验室的可用设备等因素决定了哪一种方法最适合您。

  2. 定期进行支原体检测,或在您每次冷冻新的细胞库时,采集一份样品进行支原体检测。这将确保您的实验室有可信、未受污染的细胞库可供随时使用。

处理:哦,不好!您的细胞支原体检测结果为阳性。现在该怎么办?

  1. 当然,您该做的第一件事是把被污染的细胞和您的其他易受污染的培养物分开。一旦隔离了被污染的平板或烧瓶后,您便可以开始处理以清除支原体。希望这能抢救您的细胞。

  2. 与支原体检测一样,市场上也有多种抗生素可用于去除支原体。最常用的一种处理方法是将 Plasmocin 添加到 25 𝝻g/mL 的培养基中,放置 1-2 周。 
     
  3. 在处理完被污染的细胞后,必须将其在没有抗生素的情况下培养 1-2 周,然后重新进行检测以确定处理是否成功。

如果处理后的支原体检测结果呈阳性,您可以在间隔更长一段时间后再处理细胞。在持续的情况下,时间因素和可疑细胞的价值会帮助您决定是否应该尝试不同的抗生素处理方法,或是否应该出于实验室其他人的健康和安全考虑而丢弃这些细胞。

实验室污染是一件让人头疼的事,严重到足以永久地提醒人们预防污染的价值和重要性。谨慎的无菌操作并让细胞不受支原体等污染,有助于确保细胞的健康和实验数据的可靠性。

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。

主题: 技术, 科学教育

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