远离ChIP ?


Curtis D 发布于 2018 年 1 月 31 日 06:00:00

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你的实验和数据一定让你走上了一条无法逃避的道路。你需要证明你的目的蛋白可以直接调节基因。你在心里暗想:“噢,ChIP……”

对,就是染色质免疫沉淀,就连实验名称也很长,看着就让人气馁。但你要振作起来,随时戴着你的护目镜,拿着你的移液管上样,因为我们可以成功。你看,我曾经就像你们一样。我一生中从来没有做过一次 ChIP 实验。我做的是蛋白印迹和免疫荧光实验。我只研究蛋白。我过去也不完全确定核酸是否是种东西。

问题不断来了:对于每次免疫沉淀,我需要多少细胞?那么多?!我可以少用点吗?原代细胞怎么样?组织怎么样?天哪,我是不是还在第一个步骤?这个实验步骤到底有多少个步骤?

开始了,我可能在每个实验步骤中都会犯错。我把染色质剪切得太小了。我没有把染色质剪切到足够小。我在剪切缓冲液中使用了太多的去垢剂,我在剪切缓冲液中使用了太少的去垢剂。我在免疫沉淀步骤中没有添加足够的抗体,我在免疫沉淀步骤中添加了太多的抗体(顺便说一下,这确实是会发生的)。金发姑娘不会让我的任何实验都顺利的。

有一次,我在 DNA 洗涤步骤中甚至忘记了更换离心柱,把我那刚刚分离准备用于 PCR 的 ChIP DNA 直接转入了废乙醇中,在实验台的两天工作(以及两周的细胞培养工作)就这样作废了。我使用了品质低劣的磁珠、离心柱和 PCR 试剂,它们降低了实验质量,尽管这并不是我的错。在这个领域中,我们没有很多的时间和金钱。在我最挫败的时候,我心想,“唉,我为什么要做这个?”

这个问题的答案其实很简单。我犯了所有这些错误,浪费了所有这些时间,所以现在你们可以不必像我一样。你们,这篇博文的读者。你们,真相和知识的探索者。你们,勇敢冒险进入一个染色质免疫沉淀新世界的科学家。Cell Signaling Technology 有我协助开发和改进的试剂盒专用实验步骤。我们找到了最佳的试剂,并把它们装入我们的 ChIP 试剂盒中。我们知道你们需要多少细胞才能真正获得良好、优质的结果。我们发现了为什么我们的低去垢剂剪切缓冲液优于传统的商品级缓冲液。我们滴定所有抗体来确定你们实验所需的最佳用量(这个量根据抗体本身的亲和力不同而有所变化)。我们知道构建一个 ChIP-seq 库需要多少毫微克的免疫沉淀 DNA。我们知道你可能有的多数问题的答案,因为我们亲自在实验台上弄明白了这些答案。

我亲自为数百人提供过实验步骤方面的帮助。我花了上千个小时通电话、写电子邮件和分析用户数据。几年来,我每周进行了 80 多次染色质免疫沉淀,运行了成千上万个 PCR 周期。所有这些经验都变成知识,我们想把这些知识传授给你们。使用我们的 ChIP 试剂盒和抗体,你可以就按我曾经做的来获得我们数据表上的数据。有时,当我的试剂不足时,我会直接到我们的发货部门取一个试剂盒。

因此我邀请你们浏览一下我们的网站。查看我们提供的实验步骤、ChIP 试剂盒和抗体。给自己配上进行这个“令人气馁”的实验所需的所有工具。我从一开始没有线索,到有能力胜任,再到帮助别人解疑答惑。如果我能成功,那么你们也能。如果事实是你需要证明直接基因调节,别担心。远离ChIP ?如果你需要帮助,只需给我们发送电子邮件或打电话即可。

获得 ChIP 指南

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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