如何验证组蛋白修饰抗体


Carolyn P 发布于 2017 年 2 月 01 日 03:00:00

靶向组蛋白修饰的抗体可非特异性地结合类似但脱靶的组蛋白修饰。相反,周围残基上修饰所引起的位阻会抑制它们的特异性结合。ELISA、蛋白质印迹法、ChIP 和免疫荧光法等测定法通常用来证实抗体的特异性和敏感性,但它们无法清楚地预测抗体如何与周围表位相互作用。因此,在尝试验证抗体对某个组蛋白修饰靶标的反应时,需要使用一种备选方法。继续阅读,看看我们是如何做到的。

CST 的修饰特异性组蛋白抗体使用类似于 Fuchs、S.M. 等所述的肽阵列测定法进行了验证。(1). 在单个实验中,这些芯片可评估所有组蛋白中对已知修饰的反应性,以及周围修饰对抗体检测单个修饰位点的能力的影响。因此,肽芯片测定法可让我们确认抗体是否按预期起作用。

第 1 步:芯片

如图所示,将含有单甲基化、二甲基化、三甲基化、乙酰化或未修饰赖氨酸的肽单独或与已知周围组蛋白修饰(如组蛋白 H3K4Me3)一起转移到硝酸纤维上以形成印迹。我们使用一种类似的阵列来测试我们的甲基化精氨酸抗体。

肽阵列测试

第 2 步:抗体

如图所示,按三种浓度对阵列应用组蛋白修饰抗体。这让我们能够评估抗体反应性,同时确保浓度不会使实验饱和。

第 3 步:分析

洗涤阵列并使用荧光标记的二抗进行孵育,随后使用 LI-COR® Odyssey® Infrared Imager 进行读取。

第 4 步:数据

这是我们对 Mono-Methyl-Histone H3 (Lys4) (D1A9) XP® Rabbit mAb #5326 进行的分析。

# 5326 组蛋白修饰图

查看有关组蛋白修饰抗体验证的更多示例。

如果你想了解我们如何与其他组蛋白修饰抗体作比较,你可以单击/轻击下面的下载性能比较手册,或查看此交互式数据库(Rothbart 等人,2015),该数据库对比了市售广泛使用的组蛋白修饰抗体的肽阵列数据。


下载性能比较数据

 

 

 

(1) Fuchs, S.M., et al. (2011) Curr. Biol. 21, 53-58.

LI-COR 和 Odyssey 是 LI-COR Biosciences 的注册商标。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

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