细胞过程:什么是细胞活性?如何衡量?


Tamar A. 发布于 2020 年 4 月 15 日 03:00:00

培养细胞的健康是您实验成功的关键。您是否曾对敲低、药物处理或培养条件的实验结果感到兴奋,却在之后发现这些作用发生了偏差,原因竟然是您样本中死亡细胞的数量?在您的检测中测量和比较细胞活性很重要,无论它在您的实验中是您所追求的数据还是重要控制措施。

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细胞活性是指样本群体中健康细胞的比例。测量活性对于确定实验条件下细胞生理状态是必须的。细胞活性受环境因素影响– 包括细胞培养参数的改变、接触药物和生长因子以及对多种疾病状态的反应。例如,癌细胞表现出增强的活性,这促进它们异常增殖并逃避细胞凋亡,而神经退行性和其他组织退行性疾病则以进行性细胞损失为特征。损伤和感染也会对细胞存活产生负面影响,导致坏死或凋亡细胞死亡。因此,细胞健康与疾病之间的关键联系强调了在不同实验背景和模型系统中测量细胞活性的必要性。

我们已经开发了多种技术来满足这一目的,即通过各种实验平台测量细胞活性。活性测定可以根据它们调查的基础原理机制进行分组,包括细胞增殖、质膜完整性、代谢活性和线粒体功能。除了提供细胞群体总体健康状况的快照,还可以定制检测来确定活性受损时细胞死亡的方法 - 通过细胞凋亡或坏死。 

XTT 检测 是测量细胞活性的代谢检测的一个示例。在健康细胞中,XTT 通过线粒体酶转换成橙色的甲瓒染料。然后,使用在 450 纳米处检测到的相对吸光度来估计活细胞数量。这种方法的一个优点是其简单性 – 因为它不需要细胞固定、通透或二次检测方法 – 并且能够在分析后继续检查细胞。

代谢检测的第二个示例是 刃天青检测。€‚添加到细胞培养物中后,在健康细胞中,刃天青试剂通过脱氢酶还原成为荧光试卤灵,且试卤灵的量与样品中的活细胞成比例。与 XTT 检测类似,刃天青检测中使用的细胞可以继续用于下游分析。

活/死细胞计数检测是评估细胞活性的另一种常用方法。这些检测使用细胞通透性活体染料、细胞不通透染料或两者组合,以同时标记一个群体中的活细胞和死细胞。例如,台盼蓝是一种偶氮染料,无法穿透细胞膜,因此不会从健康细胞中排出。但是,膜损坏的死亡细胞吸收台盼蓝,从而能够使用血细胞计数器计数死亡(蓝色)和存活(无色)细胞的数量。

另外,已开发出检测细胞活性的免疫组织化学法 (IHC) 方法。这种方法通常用于确定蛋白质的时间分布及其在健康与病变组织中的表达模式,以及确定发生细胞死亡且同时保持 完整组织切片细胞架构的细胞区域。€‚尤其是,细胞增殖(包括 Ki67 或 PCNA)或凋亡(包括裂解的 Caspase-3 和 PARP)的标记物通常通过 IHC 进行定量分析。

评估细胞活性的方法有很多 – 您最喜欢什么?

若想更深入讨论这些概念和细胞活性以及适用的检测,请访问关于 细胞死亡资源的 CST 网页。€‚

仅供研究使用。不得用于诊断流程。

主题: 细胞生物学

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